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A luteolina é um composto flavonóide natural, e a seguir estão alguns métodos de detecção comuns:
A cromatografia líquida de alto desempenho é baseada na diferença nos coeficientes de distribuição de diferentes substâncias entre a fase estacionária e a fase móvel para separação. A amostra é injetada em uma fase móvel (geralmente um solvente ou solvente misto), que transporta a amostra através de uma coluna cromatográfica preenchida com uma fase estacionária (como sílica gel). Diferentes compostos se movem em velocidades diferentes na coluna para obter a separação. Finalmente, a luteolina foi detectada usando detectores UV Vis, pois tem um comprimento de onda de absorção UV específico.
Preparação da amostra: Extrair e dissolver extratos vegetais ou outras amostras contendo luteolina em solventes apropriados (como metanol, etanol, etc.), e execute etapas de pré-tratamento, como filtração e centrifugação, para remover impurezas.
Configuração da condição cromatográfica: Selecione uma coluna cromatográfica adequada (como coluna cromatográfica de fase reversa C18), e a fase móvel pode ser um sistema de água de metanol ou água de acetonitrila. Adicione uma quantidade apropriada de ácido (como ácido fórmico, ácido fosfórico) de acordo com a situação real para melhorar o efeito de separação. A taxa de fluxo é geralmente entre 0, 8-1, 5 mL/min, e a temperatura da coluna é geralmente ajustada à temperatura ambiente ou a uma temperatura constante adequada (como 30-40 °C) conforme necessário. O comprimento de onda de detecção é geralmente definido em cerca de 350nm, o comprimento de onda de absorção máxima da luteolina.
-Injeção e análise: Injete a amostra processada na porta de injeção do cromatógrafo, registre o cromatograma por meio de um software de computador e realize análises qualitativas e quantitativas da luteolina com base no tempo de retenção e na área de pico.
Alta eficiência de separação pode efetivamente separarPó a granel de luteolinaA partir de outras impurezas em amostras complexas.
Alta sensibilidade de detecção, capaz de detectar baixas concentrações de luteolina.
Os resultados são precisos, têm boa reprodutibilidade e são adequados para análise quantitativa.
Desvantagens:
Os instrumentos e equipamentos são caros e exigem habilidades profissionais de manutenção e operação.
O tempo de análise é relativamente longo, especialmente para a separação de amostras complexas.
Combinando a capacidade de separação da cromatografia líquida com a alta sensibilidade e seletividade da espectrometria de massa para identificação. A amostra é primeiro separada por cromatografia líquida e depois entra no espectrômetro de massa. O espectrômetro de massa ioniza as moléculas e mede a relação massa/carga (m/z) dos íons para determinar a massa da molécula, identificando assim a luteolina. Enquanto isso, a análise quantitativa pode ser conduzida com base na força dos íons.
Pré-tratamento da amostra: Semelhante à HPLC, a amostra precisa ser extraída e purificada para remover substâncias interferentes.
Configurações dos parâmetros do instrumento: As configurações dos parâmetros para a seção de cromatografia líquida são basicamente as mesmas da HPLC, mas a seleção da fase móvel precisa considerar a compatibilidade com a espectrometria de massa. O espectrômetro de massa precisa definir parâmetros como o modo de ionização (como ionização por eletrospray ESI ou ionização química por pressão atmosférica APCI), faixa de varredura, modo de detecção (íon positivo ou modo de íon negativo), etc. Para luteolina, bons resultados de detecção podem ser obtidos no modo de íon negativo ESI.
Análise e identificação: Injete a amostra no instrumento, primeiro separe-a por cromatografia líquida e, em seguida, obtenha o espectro de massa no espectrômetro de massa. Ao comparar com bancos de dados de espectrometria de massa conhecidos de magnolol e combinar informações como tempo de retenção, a presença de magnolol é determinada e a quantificação é realizada com base na intensidade dos picos de espectrometria de massa.
Tem alta sensibilidade e seletividade, e pode identificar com precisão a estrutura da luteolina.
Traçadas de luteolina em amostras complexas também podem ser eficazesY detectado.
Desvantagens:
O instrumento tem alto custo e operação complexa, exigindo pessoal profissional para operar e analisar dados.
A análise de dados de espectrometria de massa requer um certo nível de conhecimento e experiência profissional.
O sistema conjugado na estrutura molecular da luteolina pode absorver faixas de comprimento de onda específicas da luz visível ultravioleta. De acordo com a lei de Lambert Beer (A = ε bc, onde A é a absorbância, ε é a absortividade molar, b é o comprimento do caminho óptico e c é a concentração da amostra), dentro de uma certa faixa de concentração, a absorbância é proporcional à concentração de luteolina na amostra. O conteúdo da luteolina pode ser determinado medindo a absorbância.
Desenho da curva padrão: Prepare uma série de soluções padrão de diferentes concentrações usando uma concentração conhecida de padrão de luteolina e meça a absorbância no comprimento de onda máximo de absorção de luteolina (como 350nm) usando um espectrofotômetro visível UV. Desenhe uma curva padrão com concentração como o eixo x e absorbância como o eixo y.
Determinação da amostra: Diluir o extrato da amostra de teste apropriadamente, medir a absorvância no mesmo comprimento de onda e calcular o conteúdo de luteolina na amostra com base na curva padrão.
O instrumento é simples, fácil de operar e rentável.
Para amostras com alto teor de luteolina, a detecção rápida pode ser realizada.
Desvantagens:
Má seletividade e suscetibilidade à interferência de outras substâncias com comprimentos de onda de absorção semelhantes na amostra.
Não é possível distinguir efetivamente entre luteolina e seus análogos estruturais.
Coloque a amostra em uma placa de camada fina revestida com um adsorvente (como sílica gel) e desenvolvê-lo na placa usando um agente de desenvolvimento adequado (tal como um solvente misto de ácido fórmico de acetato de etila de tolueno). Diferentes compostos têm diferentes habilidades de dessorção de adsorção entre o adsorvente e o agente em desenvolvimento, movendo-se assim diferentes distâncias na placa de camada fina para obter a separação. O extrato de Osmanthus pode ser analisado qualitativamente comparando seu valor Rf com amostras padrão, ou semi-quantitativamente analisado pela intensidade de manchas após a reação de cor.
Preparação ou compra da placa de camada fina: Você pode preparar sua própria placa de camada fina de silicone ou comprar placas de camada fina disponíveis comercialmente.
Amostragem da amostra: Dissolva a amostra em um solvente apropriado e use uma microsseringa ou capilar para localizar a amostra na linha de partida da placa de camada fina.
Desdobramento e desenvolvimento de cor: Coloque a placa de camada fina em um cilindro em desenvolvimento contendo um agente em desenvolvimento e desdobre-a. Depois que a borda frontal do agente em desenvolvimento subir a uma certa distância, remova a placa de camada fina e seque-a ao ar. Em seguida, reagentes de cor apropriados (como reagente de tricloreto de alumínio) são usados para o desenvolvimento da cor, e a reação entre luteolina e tricloreto de alumínio resultará em manchas fluorescentes sob luz ultravioleta. A posição do ponto e a intensidade são observadas sob luz UV.
O equipamento é simples, a operação é rápida e o custo é baixo.
Várias amostras podem ser examinadas preliminarmente e separadas simultaneamente.
Desvantagens:
Quantificação imprecisa, usada principalmente para análise qualitativa ou semi-quantitativa.
O efeito de separação é relativamente pobre e pode não ser possível separar completamente a luteolina e outros componentes de amostras complexas.
